嘌呤霉素Puromycin
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說明：嘌呤霉素是一種由鏈霉菌中獲取的氨基核苷抗生素，它能抑制真核和原核生物的核糖體上發(fā)生的肽基轉(zhuǎn)移。該抗生素可以作用于革蘭氏陽性菌和各種動(dòng)物、昆蟲細(xì)胞。真菌和革蘭氏陰性菌對(duì)其不敏感源于對(duì)該抗生素的滲透率較低。但是在一些特別的條件下，嘌呤霉素可作用于大腸桿菌。30多年來，嘌呤霉素作為研究蛋白合成的基本工具被廣泛使用。如今，嘌呤霉素出現(xiàn)被限制詞語更可以用來挑選有該抗生素抑制基因的質(zhì)粒。嘌呤霉素是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu), 能夠同氨基酸結(jié)合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合，并摻入到生長(zhǎng)的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點(diǎn)結(jié)合,但是不能參與隨后的任何反應(yīng), 因而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。
英文名：Puromycin, dihydrochloride (Stylomycin, P638) from Streptomyces alboniger 包裝：25mg 類別：生化試劑類
CAS:58-58-2
中文名：嘌呤霉素出現(xiàn)被限制詞語
分子式：C22H31N7O5Cl2
分子量 544.43
Purity >98%
mp: 168℃-178℃
最大吸收波長(zhǎng):275 nm & 267nm
性狀：. 溶于水(50mg/ml)銀杏提取物,黃色針狀結(jié)晶,易溶于乙醇,水中不溶。
嘌呤霉素的抗性
Pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶（PAC），被鏈霉菌產(chǎn)生的菌株取代。它位于PUR區(qū)，
這里連接了其他決定嘌呤霉素生物合成途徑的基因。
Pac基因的表達(dá)阻礙了嘌呤霉素轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)它。在某些特定條件下，嘌呤霉素
亦可用來挑選大腸桿菌的質(zhì)粒中攜帶pac基因的菌株。
篩選條件
嘌呤霉素對(duì)大腸桿菌感染性較低，但是在關(guān)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中很用。在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，
它可以替代新霉素系統(tǒng)。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞
嘌呤霉素在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系反應(yīng)中的有效濃度范圍從1-10μg/ml。實(shí)驗(yàn)初始，我們建議，
決定實(shí)驗(yàn)中抗生素的最適濃度的方法是首先該濃度可以殺死自身宿主細(xì)胞系。
嘌呤霉素可以迅速消滅不含有pac基因的真核細(xì)胞。死亡細(xì)胞從平板分離，該平板可以用于簡(jiǎn)單和初期的轉(zhuǎn)化克隆細(xì)胞鑒定。建議篩選哺乳動(dòng)物細(xì)胞的最適濃度應(yīng)當(dāng)?shù)陀谒袧舛戎怠?nbsp;
哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選方法
嘌呤霉素常用濃度范圍在1 - 10 μg/ml。等轉(zhuǎn)化出含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉
素的普通培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1. 在轉(zhuǎn)染的48小時(shí)內(nèi)，將細(xì)胞（原樣或稀釋）置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注意：細(xì)胞在快速增殖時(shí)，抗生素作用最明顯。如果細(xì)胞濃度過大，抗生素產(chǎn)生的效力也會(huì)下
降。細(xì)胞最好在他們?nèi)诤下什桓哂?5%時(shí)分裂最佳。
2.每隔3-4天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3.篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿
主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。
4.轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。這次
富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
儲(chǔ)存條件和穩(wěn)定性：
嘌呤霉素可在室溫中運(yùn)輸，收到產(chǎn)品之后應(yīng)該存放在4℃的環(huán)境中。
嘌呤霉素在室溫條件下可存放3個(gè)月，4℃條件下保質(zhì)期一年。為了達(dá)到最理想的穩(wěn)定狀
態(tài)和最長(zhǎng)的保質(zhì)期，最好存放于-20°C環(huán)境中，保質(zhì)期為2年。
質(zhì)量控制和溶解方法：
HPLC控制，產(chǎn)品純度大于98%。溶解方法，5-50 mg/mL in dH2O, store at -20℃。
注意事項(xiàng)：
嘌呤霉素是一個(gè)有毒化合物，小心拿放。
本產(chǎn)品由北京中生瑞泰科技有限公司優(yōu)惠供應(yīng)，公司常年現(xiàn)貨，歡迎廣大科研工作者及經(jīng)銷商同仁前來咨詢選購(gòu)；另外公司專業(yè)從事進(jìn)口科研生化試劑的批發(fā)及零售業(yè)務(wù)，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)等諸多生命科研領(lǐng)域。因公司業(yè)務(wù)發(fā)展的需要，現(xiàn)誠(chéng)征各地經(jīng)銷代理商，歡迎有志從事本行業(yè)的精英、同行蒞臨指導(dǎo)。
